Microscopie confocale

La microscopie confocale réussit à observer simultanément les interactions des objets biologiques avec des surfaces contrôlées et la structuration de ces surfaces jusqu’à l’échelle submicrométrique.

Responsable

Petithory Tatiana
Contact : tatiana.petithory@uha.fr

Description

Domaines d’activités :
La microscopie confocale observe et caractérise l’interaction des objets biologiques avec des surfaces contrôlées, elle permet aussi la caractérisation topographique à l’échelle du micron et du submicron. Cela l’amène en particulier à étudier le comportement cellulaire au voisinage de surfaces structurées physiquement ou chimiquement.  

Principaux équipements (forces de l’Institut) :
La plateforme de microscopie confocale est équipée

1) d’un Laser Scanning microscope (LSM) ZEISS 800

2) d’un Spinning disk confocal CSU-W1 (Yokogawa) sur statif Nikon Eclipse Ti2

Descriptif technique

1) Laser Scanning microscope (LSM) ZEISS 800

Statif Axio imager M2 Upright
Platine piezo(D) motorisée XY (130*85) • Commande Piezo
• Domaine d’utilisation : 130mm x 35 mm
• Vitesse maximale : 100mm/s
• Résolution 0,2μm
• Reproductibilité +/- 1μm
• Exactitude absolue 1μm
Diodes lasers d’excitation 405nm, 488nm 555nm 640nm
détecteurs 2 PMTs
Filtres • PMT1 : 420-480 nm, 420-550 nm
• PMT2 : LP420 nm, LP490 nm, LP640 nm, BP 510-550 nm, 420-550 nm
Objectifs
Objectifs Ouverture numérique Distance de travaille
10x Air EC « Plan-Neofluar » 0,3 5,2 mm
20x Air « Plan Apochromat » 0,8 5,5 mm
20x Eau W « Plan Apochromat » DIC 1 1,8 mm
50x Air EC « Epiplan-Neofluar » 0,8 0,58 mm
50x Air LD EC « Epiplan-Neofluar » 0,55 9,1 mm
63x Huile « Plan Apochromat » 1,4 0,19 mm
63x Eau W « Plan Apochromat » 1 2,1 mm
Environnement Chambre d’incubation OkoLab, contrôle de la température et du pourcentage de CO2
Informatique Ordinateur permettant l’analyse d’images avec les logiciels ZEN 2012, IMARIS, Image J ou ICY.
Accessibilité en libre-service oui – après formation par le responsable de plateforme.

2) Spinning disk confocal CSU-W1 (Yokogawa) sur statif Nikon Eclipse Ti2

Statif Eclipse Ti2-E inversé NIKON équipé du « perfect focus » dernière génération qui permet la correction de la mise au point en temps réel
Platine motorisée

10 nm res/300nm repetition en XY

0,2/0,4 nm/100nm repetition en Z (piezzo)

Source d’excitation épi-fluorescence LUMENCOR SOLA SMII : 4 longueurs d’onde 405nm ; 488nm ; 561nm ; 640nm
Objectifs

–       10x Huile, eau, glycérol ON 0,5 CFI Plan Apochromat

–       20x Eau ON 0,95 CFI APO LWD (0,99-0,90) Lambda S

–       60x Huile ON 1,4 CFI Plan APO LBDA

SD CSU-W1

–       Mono- disk (50µm)

–       Vitesse 4000 rpm

–       Champ 10x16 mm

Laser –       Oxxius 4 longueurs d’ondes 405-488-561-638 nm
Camera

–       sCMOS Hamamatsu Orca Flash 4.0

–       4,2 MegaPixel

–       Taille du pixel 6,2x6,2 µm

–       Coefficient d’efficacité 82 %

–       Refroidit à l’air

Incubation –       Enceinte OKOlab contrôlée en T° et CO2 avec insert pour boîte de pétrie 35mm, plaques et lames comprenant une pompe à air et ses contrôleurs et mélangeur
Contrôle –       NIS-Element