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Microscopie confocale

La microscopie confocale réussit à observer simultanément les interactions des objets biologiques avec des surfaces contrôlées et la structuration de ces surfaces jusqu’à l’échelle submicrométrique.

Responsable

Petithory Tatiana
Contact : tatiana.petithory@uha.fr

Description

Domaines d’activités :
La microscopie confocale observe et caractérise l’interaction des objets biologiques avec des surfaces contrôlées, elle permet aussi la caractérisation topographique à l’échelle du micron et du submicron. Cela l’amène en particulier à étudier le comportement cellulaire au voisinage de surfaces structurées physiquement ou chimiquement.  

Principaux équipements (forces de l’Institut) :

  • LSM 800 (Laser Scanning Microscope, ZEISS) configuration droit équipé du module de super-résolution Airyscan® et du module de réflexion pour la topographie

  • SD Spinning Disk Confocal Microscope (Yokogawa, Nikon) configuration inversée

Descriptif technique

1) LSM 800 (Laser Scanning Microscope, ZEISS)

Statif

Axio imager M2 Upright

Platine piezo(D) motorisée XY (130*85)

• Domaine d’utilisation : 130mm x 35 mm
• Vitesse maximale : 100mm/s
• Résolution 0,2μm
• Reproductibilité +/- 1μm
• Exactitude absolue 1μm

Diodes lasers d’excitation

405nm, 488nm 555nm 640nm

Détecteurs

2 Photomultiplicateurs

Module de super Résolution AiryScan

Détecteur AiryScan GaAsp

Filtres

• PMT1 : 420-480 nm, 420-550 nm
• PMT2 : LP420 nm, LP490 nm, LP640 nm, BP 510-550 nm, 420-550 nm

Objectifs

Objectifs

Ouverture numérique

Distance de travail

10x Air EC « Plan-Neofluar »

0,3

5,2 mm

20x Air « Plan Apochromat »

0,8

5,5 mm

20x Eau W « Plan Apochromat » DIC

1

1,8 mm

50x Air EC « Epiplan-Neofluar »

0,8

0,58 mm

50x Air LD EC « Epiplan-Neofluar »

0,55

9,1 mm

63x Huile « Plan Apochromat »

1,4

0,19 mm

63x Eau W « Plan Apochromat »

1

2,1 mm

Environnement

Chambre d’incubation OkoLab dernière génération contrôle de la température, pourcentage de CO2 et contrôle d’humidité

Informatique

Ordinateur permettant l’analyse d’images avec les logiciels ZEN 2012, IMARIS, Image J ou ICY.

Accessibilité en libre-service

oui – après formation par le responsable de plateforme.

 

2) SD Spinning Disk Confocal Microscope (Yokogawa, Nikon)

Statif

Eclipse Ti2-E inversé NIKON équipé du « perfect focus » dernière génération qui permet la correction de la mise au point en temps réel

Platine motorisée

10 nm res/300nm repetition en XY

0,2/0,4 nm/100nm repetition en Z (piezzo)

Source d’excitation épi-fluorescence

LUMENCOR SOLA SMII : 4 longueurs d’onde 405nm ; 488nm ; 561nm ; 640nm

Objectifs

–       10x Huile, eau, glycérol ON 0,5 CFI Plan Apochromat

–       20x Eau ON 0,95 CFI APO LWD (0,99-0,90) Lambda S

–       60x Huile ON 1,4 CFI Plan APO LBDA

SD CSU-W1

–       Mono- disk (50µm)

–       Vitesse 4000 rpm

–       Champ 10x16 mm

Laser

–       Oxxius 4 longueurs d’ondes 405-488-561-638 nm

Camera

–       sCMOS Hamamatsu® Orca Flash 4.0

–       4,2 MegaPixel

–       Taille du pixel 6,2x6,2 µm

–       Coefficient d’efficacité 82 %

–       Refroidit à l’air

Incubation

–       Enceinte OKOlab® contrôlée en T° et CO2 avec insert pour boîte de pétrie 35mm, plaques et lames comprenant une pompe à air et ses contrôleurs et mélangeur

Logiciel

–       NIS-Element